microRNA Isolation Kit——分离miRNA或靶mRNA的新工具

microRNA Isolation Kit——分离miRNA或靶mRNA的新工具
近年来，microRNA(miRNA)成为生命科学和医学领域的明星。虽然只有22个左右的碱基，但是在基因表达调控中起着至关重要的作用，参与细胞分化、个体发育，且与多种疾病相关。因此对于miRNA的研究越来越多。传统的miRNA分离方法是结合了基于酚/胍的样品裂解和硅胶膜离心柱，直接将总RNA分离出来，不能直接分离出miRNA。
Wako的miRNA纯化试剂盒能够制备高纯度的miRNA片段，在细胞中，成熟的miRNA分子可与Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默复合体(RISC)，此纯化试剂盒利用免疫沉淀方法，与Ago蛋白结合抗体的特异性，分离miRNA。纯化的miRNA片段含有非常少的rRNA和tRNA降解片段。与传统的miRNA纯化方法相比，有效提高了miRNA的克隆效率。纯化的miRNA可用于分析miRNA的靶mRNA。
n  特点
1)      内源性Ago蛋白的免疫沉淀
2)      高度纯化与Ago蛋白结合的miRNA
3)      其他RNAs的污染少，比如rRNA & tRNA
4)      纯化的microRNA片段可用于高效的microRNA克隆和微阵列
5)      可同时分离miRNA和靶mRNA，便于直接进行后续的靶mRNA的克隆和定量分析
 

与常规方法比较

	常规方法	Wako的新方法
总RNA提取	需要	不需要
小RNA (≦200nt)的纯化
变性PAGE电泳
从变性PAGE凝胶中进行凝胶抽提
从变性PAGE胶中进行凝胶纯化
rRNA片段污染率	高	低
tRNA片段污染率	高	低
操作时间	≦12小时	≦4小时

使用例1：
图1：使用microRNA Isolation Kit,Human Ago2纯化microRNA片段
从培养的人类细胞系（HeLa,HepG2,HEK293）中纯化的microRNA片段用Urea-PAGE和银染方法（Wako Cat. No. 311-03961；CLEAR STAIN Ag）检测。每个细胞系的数目大约是5×106。上样量是用该试剂盒纯化后获得的5ul microRNA溶液（制备的溶液一般是10ul）。

  siRNA药理研究
将小分子干扰RNA（siRNA）直接注入细胞中，这些siRNA结合蛋白元件，也可形成RISC，此试剂盒也可纯化与Ago2结合的siRNA，便于后续的siRNA研究分析。因此此试剂盒不仅能分离miRNA，亦可作用于siRNA，大大拓宽了试剂盒的使用范围。
 
后续研究：
1）RNAi的抑制效果
2）siRNA的药代过程
3）体内siRNA的稳定性
4）毒性/副作用
5）对于非特异性mRNAs的脱靶效应

 
货号               品名                                              规格
 291-70201microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10tests      
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10tests    
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2     10tests    
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10tests  
290-66501 microRNA Cloning Kit 8tests    
298-65103 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution                  200units   
292-65101 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution                          500units  
298-67901 PCR Purification Kit            30tests 
298-68001 Target mRNA Cloning Kit            10tests

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